下面小编为大家整理了杜氏盐藻硝酸盐还原酶缺陷型突变株的筛选与鉴定，本文共3篇，欢迎阅读与借鉴!
篇1：杜氏盐藻硝酸盐还原酶缺陷型突变株的筛选与鉴定
杜氏盐藻硝酸盐还原酶缺陷型突变株的筛选与鉴定
目的:制备杜氏盐藻氯酸盐抗性突变株库并从中筛选出硝酸盐还原酶(NR)缺陷型突变株,测定其NRcDNA全长序列,分析其突变位点.方法:①用乙基亚硝基脲(ENU)对杜氏盐藻进行诱变,得到突变株库.然后用氯酸盐抗性筛选方法获得氯酸盐抗性藻株,经复筛和不同氮源生长试验,获得了氯酸盐抗性突变株库.再用96孔板法进行单藻培养,获得氯酸盐抗性突变株单藻群.用磺胺比色法测定各个单藻群的NR活性,挑选出NR活性完全丧失的突变株.然后用氯酸盐抗性实验和不同氮源生长实验验证其NR突变的稳定性.②根据已知的盐藻NR全长序列,设计3对PCR引物,提取突变株盐藻细胞mRNA,反转录成cDNA,分3段扩增其NR cDNA的'全长序列,产物与T载体连接后转化至大肠杆菌JM109中,经筛选后测序,测序结果与野生型盐藻NR eDNA序列比较,分析其突变位点.结果:序列分析表明,3株突变株共有11处相同的突变,其中的3处点突变引起了氨基酸性质的改变.它们均在近3'端有一段相同的移码突变,造成19个氨基酸的完全改变.此外,2株还分别由于在1 235和1 639的位点突变而产生了一个终止密码子.结论:筛选出了3株杜氏盐藻NR完全缺陷型突变株.
作 者：李慎柯 贾岩龙 刘红涛 李杰 鲁照明 王建民 薛乐勋 LI Shenke JIA Yanlong LIU Hongtao LI Jie LU Zhaoming WANG Jianmin XUE Lexun 作者单位：郑州大学细胞生物学研究室,郑州大学第一附属医院临床医学重点学科开放实验室,郑州,450052 刊 名：郑州大学学报（医学版） ISTIC PKU英文刊名：JOURNAL OF ZHENGZHOU UNIVERSITY(MEDICAL SCIENCES) 年，卷(期)： 41(3) 分类号：Q754 关键词：杜氏盐藻 硝酸盐还原酶 突变株篇2：杜氏盐藻硝酸盐还原酶基因5′上游序列的克隆与功能分析
杜氏盐藻硝酸盐还原酶基因5′上游序列的克隆与功能分析
目的: 克隆杜氏盐藻硝酸盐还原酶(NR)基因5′上游序列,并对其功能进行分析.方法: 利用BamHI、EcoRI、HindⅢ、PstⅠ、SalⅠ、Xbal 6种限制性内切酶分别酶切盐藻基因组DNA,并与接头连接,构建成盐藻基因组步行文库.采用LA-PCR方法,从上述盐藻步行基因组文库中扩增NR基因5′上游序列,测序并进行分析.为检测其表达特性,构建了该片段与GUS嵌合基因的表达载体pNR-GUS,通过电击法将所构建的重组表达载体转化盐藻,组织化学染色法观察GUS的'表达.结果: 从盐藻基因组步行文库中扩增出约1200bp特异片段,序列分析表明5′上游序列含有启动子的特征性序列.GUS瞬时表达染色结果显示,该DNA片段具有硝酸盐诱导和铵抑制的启动子活性.结论: 所克隆的盐藻的5′上游序列可能是一种具有“开关”活性的可控性启动子.
作 者：李杰 贾岩龙 闫红霞 潘卫东 薛乐勋 LI Jie JIA Yan-long YAN Hong-xia PAN Wei-dong XUE Le-xun 作者单位：郑州大学细胞生物学研究室,郑州大学第一附属医院,郑州,450052 刊 名：中国生物工程杂志 ISTIC PKU英文刊名：CHINA BIOTECHNOLOGY 年，卷(期)：2006 26(11) 分类号：Q94 关键词：杜氏盐藻 硝酸盐还原酶基因 5′上游序列 功能篇3：酵母过氧化物体生物合成缺陷突变株的诱变、筛选和鉴定
酵母过氧化物体生物合成缺陷突变株的诱变、筛选和鉴定
过氧化物体对生物的生长和发育非常重要,人类很多疾病就是由于过氧化物体生物合成缺陷引起.以解脂耶氏酵母E122为出发菌,采用硫酸二乙酯诱变,获得了两株过氧化物体生物合成缺陷突变株,其中一株为温度敏感的突变株.在正常生长条件下,突变株的免疫荧光分析显示弥散的染色模式,且在电镜下观察不到过氧化物体的形态结构.将克隆于表达载体pINA445上的目前所发现的'与过氧化物体生物合成有关的基因转化这两株突变株,发现它们均不能恢复其在含油酸的培养基上的生长,表明这两个突变株是由与过氧化物体生物合成相关的新基因的突变引起.这两个突变株的获得为参与过氧化物体生物合成的新基因的发现奠定了基础.
作 者：罗玉萍 李思光 LUO Yu-ping LI Si-guang 作者单位：南昌大学生命科学学院,南昌,330047 刊 名：微生物学报 ISTIC PKU英文刊名：ACTA MICROBIOLOGICA SINICA 年，卷(期)：2006 46(3) 分类号：Q93 关键词：解脂耶氏酵母 过氧化物体 生物合成缺陷 诱变 筛选
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