下面是小编为大家整理的CDC6靶向RNA干扰质粒载体的构建及生物活性鉴定，本文共9篇，以供大家参考借鉴!
篇1：CDC6靶向RNA干扰质粒载体的构建及生物活性鉴定
CDC6靶向RNA干扰质粒载体的构建及生物活性鉴定
目的:构建小鼠CDC6基因的RNAi真核表达载体PGCsilencerTM U6/Neo/GFP/RNAi,观察其转染小鼠肝细胞前后CDC6的表达变化.方法:根据GenBank中CDC6的序列,设计特异性siRNA序列,将模板序列克隆至PGCsilencer U6/Neo/GFP质粒中,通过测序鉴定后,用脂质体将重组子转染至正常小鼠肝细胞中,用RT-PCR检测CDC6的'mRNA的表达及用Western blot方法检测CDC6蛋白水平的表达,并比较转染前后其表达水平的变化.结果:经测序,模板序列与设计序列完全正确.经过RT-PCR及Western blot方法检测,转染干扰质粒后,小鼠肝细胞中CDC6表达在mRNA及蛋白水平都有明显的下降.结论:成功构建了CDC6基因的RNAi真核表达载体并转染至小鼠肝细胞中,为下一步探讨CDC6在肝再生的作用奠定了基础.
作 者：还勇为 陈平朱瑾 闫洪涛 何中林 陈胤 HUAN Yong-wei CHEN Ping ZHU Jin YAN Hong-tao HE Zhong-lin CHENG Yin 作者单位：还勇为,陈平,闫洪涛,何中林,陈胤,HUAN Yong-wei,CHEN Ping,YAN Hong-tao,HE Zhong-lin,CHENG Yin(第三军医大学大坪医院野战外科研究所肝胆外科,重庆,400042)朱瑾,ZHU Jin(第三军医大学西南医院全军肝胆外科研究所,重庆,400038)
刊 名：现代生物医学进展 ISTIC英文刊名：PROGRESS IN MODERN BIOMEDICINE 年，卷(期)： 7(10) 分类号：Q78 Q813 关键词：CDC6 RNA干扰 质粒 载体构建篇2：Spl基因RNA干扰载体的构建及鉴定
Spl基因RNA干扰载体的构建及鉴定
目的:构建干扰载体pSilencer 3.1-spl,并初步研究其对Spl基因的干扰作用.方法:根据Spl cDNA编码序列,设计并合成针对Spl基因的特异性RNA干扰片段,并将其克隆入pSilencer 3.1-Hl neo干扰载体中,构建Spl基因小干扰RNA(siRNA)真核表达载体pSilencer 3.1-Spl;分别将阴性对照载体pSilencer 3.1与重组载体pSilencer 3.1-Spl经脂质体LipofectAMINE介导转染HeLa细胞,采用RT-PCR、Western blot方法分别检测Spl基因的'转录与表达水平.结果:构建了Spl基因siRNA真核表达载体pSilencer 3.1-Spl,经酶切、测序鉴定证实克隆正确,并在mRNA水平和蛋白水平证实了载体的干扰效果.结论:特异性siRNA能明显抑制Spl基因在HeLa细胞中的表达,为进一步研究Spl的生物学功能和作用机制奠定了实验基础.
作 者：曲璇 陈苏宁 吴琳 申亮亮 林伟 赵华栋 刘新平张健 QU Xuan CHEN Su-Ning WU LinSHEN Liang-Liang LIN Wei ZHAO Hua-Dong LIU Xin-Ping ZHANG Jian 作者单位：曲璇,吴琳,申亮亮,林伟,赵华栋,刘新平,张健,QU Xuan,WU LinSHEN,Liang-Liang,LIN Wei,ZHAO Hua-Dong,LIU Xin-Ping,ZHANG Jian(第四军医大学,基础部生物化学与分子生物学教研室,国家肿瘤生物学重点实验室,陕西,西安,710032)陈苏宁,CHEN Su-Ning(第四军医大学,基础部生物化学与分子生物学教研室,国家肿瘤生物学重点实验室,西京医院药剂科,陕西,西安,710032)
刊 名：生物技术通讯 ISTIC英文刊名：LETTERS IN BIOTECHNOLOGY 年，卷(期)： 19(4) 分类号：Q78 关键词：RNA干扰 Spl基因 小干扰RNA篇3：靶向Nrf2基因RNA干扰真核表达载体的构建
靶向Nrf2基因RNA干扰真核表达载体的构建
目的:利用pSUPER载体构建针对人核因子E2 p45相关因子2(Nrf2)基因的RNA干扰真核表达载体,为研究Nrf2基因在结肠癌化学预防中的作用奠定实验基础.方法:设计特异性针对Nrf2基因的寡核苷酸序列及相应的对照序列,构建重组载体pSUPER-Nrf2转染人结肠癌HT-29细胞.同时转染pEGFP-N1质粒,通过荧光显微镜观察及流式细胞仪检测绿色荧光监测转染效率,共转染pEGFP-N1 48h后G418筛选稳定表达的细胞.RT-PCR和Western blot检测瞬时及稳定转染细胞Nrf2基因的表达,观察稳定筛选出的细胞中UGT1A基因mRNA水平的表达变化.结果:成功构建RNA干扰真核表达载体pSU-PER-Nrf2.转染后24～96 h,荧光显微镜及FCM检测显示转染效率为30%～75%.瞬时转染pSUPER-Nff2-A2,pSUPER-Nrf2-B2重组质粒Nrf2 mRNA的.表达差异无显著性(P＞0.05);瞬时转染72 h及稳定转染后,pSUPER-Nrf2-A1,pSUPER-Nrf2-B1可显著抑制Nrf2基因的表达.RT-PCR检测显示,稳定筛选出的细胞中UGT1A表达水平降低(P＜0.05).结论:成功构建了Nrf2的RNA干扰表达载体,筛选并获得低表达Nrf2基因的稳定克隆,筛选出的细胞UGT1A表达水平明显降低,表明Nrf2可能对UGT1A酶的表达具有调节作用.
作 者：杨晓云 李延青 梁晓红 郭玉婷 袁俊华 张燕 朱强 YANG Xiao-yun LI Yan-qing LIANG Xiao-hong GUO Yu-ting YUAN Jun-hua ZHANG Yan ZHU Qiang 作者单位：杨晓云,李延青,郭玉婷,袁俊华,张燕,朱强,YANG Xiao-yun,LI Yan-qing,GUO Yu-ting,YUAN Jun-hua,ZHANG Yan,ZHU Qiang(山东大学,齐鲁医院消化内科,山东,济南,250012)梁晓红,LIANG Xiao-hong(山东大学,免疫学研究所,山东,济南,250012)
刊 名：山东大学学报（医学版） ISTIC PKU英文刊名：JOURNAL OF SHANDONG UNIVERSITY(HEALTH SCIENCES) 年，卷(期)： 44(4) 分类号：Q786 关键词：基因,Nrf2 尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶 RNA干扰 结肠肿瘤篇4：Survivin靶向的短发夹RNA表达载体的构建
Survivin靶向的短发夹RNA表达载体的构建
目的:构建存活素(Survivin)基因短发夹RNA (short hairpin RNA,shRNA)重组质粒并测序鉴定,为下一步探索乳腺癌基因治疗的RNA干扰途径建立基础.方法:设计并合成有小发夹结构的'8条DNA片段,退火成互补双链后克隆至pSilencer adeno 1.0-CMV载体中构建重组质粒,转化大肠杆菌DH5α菌株,提取质粒行酶切鉴定后测序分析.结果:酶切鉴定和测序结果证实构建成功.结论:survivin shRNA重组质粒的成功构建为下一步用腺病毒包装,并感染荷瘤裸鼠行靶向RNA干扰抗乳腺癌的研究打下基础.
作 者：谢富华 王润秀 曹淑萍 吴小云 范启兰 梁念慈 XIE Fu-hua WANG Run-xiu CHAO Shu-ping WU Xiao-yun FAN Qi-lan LIANG Nian-ci 作者单位：谢富华,XIE Fu-hua(赣南医学院生物化学与分子生物学教研室,江西,赣州,341000;广东医学院生物化学与分子生物学研究所,广东,湛江,524023)王润秀,WANG Run-xiu(赣南医学院第一附属医院肾内科,江西,赣州,341000)
曹淑萍,CHAO Shu-ping(江西省峡江县人民医院儿科,江西,峡江,331400)
吴小云,范启兰,WU Xiao-yun,FAN Qi-lan(赣南医学院生物化学与分子生物学教研室,江西,赣州,341000)
梁念慈,LIANG Nian-ci(广东医学院生物化学与分子生物学研究所,广东,湛江,524023)
刊 名：赣南医学院学报 英文刊名：JOURNAL OF GANNAN MEDICAL COLLEGE 年，卷(期)： 29(2) 分类号：Q518.4 关键词：survivin RNA干扰 shRNA 质粒构建篇5：CD147 shRNA质粒表达载体的构建及鉴定
CD147 shRNA质粒表达载体的构建及鉴定
目的 构建表达细胞外基质金属蛋白酶诱导因子(CD147,EMMPRIN)基因序列特异性的短发夹样RNA(short hairpin RNA,shRNA)载体.方法 根据CD147基因序列及shRNA设计原则,化学合成两段编码短发夹RNA寡核苷酸序列,将其定向克隆到pGenesil-1.1质粒表达载体中,重组构建RNAi质粒,并对重组质粒进行酶切分析.结果 限制性内切酶Eeo31I和SacI酶切显示设计合成的shRNA编码序列被成功插入pGenesil-1.1质粒载体中,酶切结果证实插入片段与设计序列完全一致,成功构建针对基因CD147的'shRNA质粒表达载体.结论 成功构建人CD147基因重组载体,为研究CD147蛋白的生物学效应和骨肉瘤的治疗提供实验依据.
作 者：逯强 吕刚 王岩峰 薛义军 作者单位：逯强(中国医科大学附属第一医院骨科,辽宁沈阳,110001;华北煤炭医学院附属骨科医院,河北唐山,063000)吕刚,王岩峰(中国医科大学附属第一医院骨科,辽宁沈阳,110001)
薛义军(中国医科大学附属第一医院泌尿外科,辽宁沈阳,110001)
刊 名：解剖科学进展 ISTIC英文刊名：PROGRESS OF ANATOMICAL SCIENCES 年，卷(期)： 16(3) 分类号：Q782 R738 关键词：CD147 shRNA 质粒 载体 RNAi篇6：大鼠CD40基因RNA干扰真核表达载体的构建及鉴定
大鼠CD40基因RNA干扰真核表达载体的构建及鉴定
目的:构建靶向大鼠CD40基因小分子干扰RNA(siRNA)真核细胞表达载体.方法:利用Ambion公司的网上设计工具,设计2个靶向CD40基因的发夹状siRNA,通过化学合成的方法合成2对分别互补的寡核苷酸链,退火后将双链DNA片段连接至pSilencer4.1-CMV neo vector的.多克隆位点,转化扩增提取质粒,对重组质粒进行BamHⅠ和Hind Ⅲ双酶切电泳鉴定和DNA序列分析鉴定.结果:经酶切电泳鉴定和DNA序列分析鉴定,目的片段与pSilencer4.1-CMV neo vector连接正确,靶向大鼠CD40基因的siRNA重组表达质粒构建成功.结论:成功构建了大鼠CD40基因的RNA干扰真核表达载体pSilencer4.1-CMV-CD40.1和pSilencer4.1-CMV-CD40.2,为进一步研究CD40基因在同种器官移植排斥反应中的作用奠定基础.
作 者：王楠 马庆久 鲁建国 何显力 邹爱民 李坤 WANG Nan MA Qing-jiu LU Jian-guo HE Xian-li ZOU Ai-min LI Kun 作者单位：王楠,马庆久,鲁建国,何显力,WANG Nan,MA Qing-jiu,LU Jian-guo,HE Xian-li(第四军医大学唐都医院普通外科,陕西西安,710038)邹爱民,李坤,ZOU Ai-min,LI Kun(第四军医大学唐都医院中心实验室,陕西西安,710038)
刊 名：医学研究生学报 ISTIC英文刊名：JOURNAL OF MEDICAL POSTGRADUATES 年，卷(期)： 21(3) 分类号：Q782 关键词：RNA干扰 CD40 重组载体篇7：载体介导的人支气管上皮细胞DNA聚合酶β基因的靶向RNA干扰
载体介导的人支气管上皮细胞DNA聚合酶β基因的靶向RNA干扰
目的运用载体介导的RNA干扰技术靶向抑制人DNA聚合酶β基因在支气管上皮细胞中的表达,为研究DNA聚合酶β在环境化学污染物所致DNA损伤修复中的功能和机制作准备.方法利用分子克隆技术构建含pU6启动子的人DNA聚合酶β基因RNA干扰特异性绿色荧光蛋白C1载体重组子“pEGFP-C1-U6-dsRNA”;以脂质体法将载体重组子转染人支气管上皮细胞,同时以空白细胞和空载体转染细胞作对照;在经G418筛选后,以荧光显微成像技术观察细胞的转染效果,以蛋白印迹法分析转染后细胞中的'DNA聚合酶β表达情况.结果在转染重组子的细胞中,DNA聚合酶β的表达明显下调,仅相当于正常细胞的17.3%.结论人支气管上皮细胞DNA聚合酶β基因的靶向抑制成功.
作 者：胡大林 庄志雄 刘移民 何云 纪卫东 方道奎 沙焱 涂晓志 杨建平 作者单位：中山大学公共卫生学院,广州,510080 刊 名：卫生研究 ISTIC PKU英文刊名：JOURNAL OF HYGIENE RESEARCH 年，卷(期)： 35(2) 分类号：Q555 R994.6 关键词：重组载体 RNA干扰 DNA聚合酶β基因篇8：人TBK1小干扰RNA质粒的构建及稳定干扰TBK1细胞株的筛选
人TBK1小干扰RNA质粒的构建及稳定干扰TBK1细胞株的筛选
目的:构建人TANK结合激酶1(TBK1)的小干扰RNA真核表达质粒,并筛选出稳定干扰TBK1的细胞株.方法:根据文献报道的序列和载体的黏性末端,设计合成2条针对TBK1的DNA序列,退火后连接到载体pSUPER.retro.neo+gfp上,经测序分析正确后得到质粒psiTBK1.用脂质体转染质粒psiTBK1到MCF-7细胞中,经G418加压筛选稳定表达TBK1小干扰RNA的细胞株,用免疫印迹检测细胞中TBK1的表达情况,将干扰效果好的'细胞株命名为MCF-7/siTBK1,再用萤光素酶试验检测MCF-7/siTBK1细胞对外源TBK1诱导干扰素-β(IFN-β)转录的情况.结果:免疫印迹结果证实建立的稳定细胞株MCF-7/siTBK1能够有效干扰TBK1的表达,并在外源TBK1存在的情况下抑制IFN-β的转录活性.结论:构建了表达TBK1小干扰RNA的质粒psiTBK1,筛选出稳定干扰,IBK1表达的细胞株MCF-7/siTBK1,为深入研究TBK1在先天免疫中的作用提供了平台.
作 者：孙静 魏从文 管楷 程孝中 徐扬 袁媛 尹晴晴 宋婷 郑子瑞 张艳红 钟辉 SUN Jing WEI Cong-Wen GUAN Kai CHENG Xiao-Zhong XU Yang YUAN Yuan YIN Qing-Qing SONG Ting ZHENG Zi-Rui ZHANG Yan-Hong ZHONG Hui 作者单位：孙静,SUN Jing(军事医学科学院,生物工程研究所,北京,100850;北京市公安医院,北京,100121)魏从文,宋婷,张艳红,钟辉,WEI Cong-Wen,SONG Ting,ZHANG Yan-Hong,ZHONG Hui(军事医学科学院,生物工程研究所,北京,100850)
管楷,程孝中,袁媛,尹晴晴,GUAN Kai,CHENG Xiao-Zhong,YUAN Yuan,YIN Qing-Qing(军事医学科学院,生物工程研究所,北京,100850;安徽大学,生命科学院,安徽,合肥,230039)
徐扬,郑子瑞,XU Yang,ZHENG Zi-Rui(军事医学科学院,生物工程研究所,北京,100850;吉林大学,分子酶学工程实验室,吉林,长春,130012)
刊 名：生物技术通讯 ISTIC英文刊名：LETTERS IN BIOTECHNOLOGY 年，卷(期)： 21(2) 分类号：Q78 关键词：TANK结合激酶1 小干扰RNA 萤光素酶试验 转录活性篇9：介导大鼠结缔组织生长因子基因沉默的慢病毒载体转移质粒的构建及鉴定
介导大鼠结缔组织生长因子基因沉默的慢病毒载体转移质粒的构建及鉴定
目的:构建介导大鼠结缔组织生长因子(CTGF)基因沉默的'慢病毒载体转移质粒pGCL-CTGF,为进一步包装慢病毒载体奠定基础.方法:以大鼠CTGF基因为靶基因,根据RNA干扰(RNAi)序列设计原则,设计4对有小发夹结构的RNAi靶点序列,退火形成双链DNA,双酶切后定向克隆到慢病毒载体转移质粒pGCL-GFP中,构建4个含靶基因片段的重组慢病毒载体转移质粒pGCL-CTGF,并对质粒进行PCR及测序鉴定.结果:CTGF的短发夹RNA(shRNA)片段被成功克隆到慢病毒载体转移质粒pGCL-GFP中,4个插入序列与设计的靶基因片段完全一致.结论:构建了能够表达4个含CTGF靶基因片段的慢病毒载体转移质粒,为进一步包装介导CTGF基因沉默的慢病毒载体奠定了基础.
作 者：彭梅娟 郝春秋 姜泓 谢玉梅 张岩 李羽 陈隆 白雪帆 PENG Mei-Juan HAO Chun-Qiu JIANG Hong XIE Yu-Mei ZHANG Yan LI Yu CHEN Long BAI Xui-Fan 作者单位：第四军医大学,唐都医院感染病诊疗中心,陕西,西安,710038 刊 名：生物技术通讯 ISTIC英文刊名：LETTERS IN BIOTECHNOLOGY 年，卷(期)：2008 19(3) 分类号：Q78 关键词：结缔组织生长因子 慢病毒载体 转移质粒 肝纤维化
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