小编在这里给大家带来汉滩病毒G1S0.7嵌合基因重组腺病毒的构建及鉴定，本文共7篇，希望大家喜欢!
篇1：汉滩病毒G1S0.7嵌合基因重组腺病毒的构建及鉴定
汉滩病毒G1S0.7嵌合基因重组腺病毒的构建及鉴定
目的在本室前期工作的基础上构建汉滩病毒M基因G1片段与S基因0.7kb片段嵌合基因的重组腺病毒.方法构建含有汉滩病毒G1S0.7嵌合基因的转移载体pShuttle-G1S0.7,然后通过特异性的酶切将嵌合基因与腺病毒DNA相连,电转化E.coli JM109,获得重组腺病毒Adeno-G1S0.7 DNA,转染HEK293细胞得到重组腺病毒.进一步对重组腺病毒的滴度和表达产物进行鉴定.结果构建的含G1S0.7嵌合基因的.重组腺病毒,滴度可达1013～1015PFU/L;该重组腺病毒感染Vero-E6细胞后,表达出可被抗汉滩病毒核蛋白及糖蛋白G1的特异性单抗(mAb)所识别的融合蛋白.结论利用腺病毒表达系统,成功地表达同时具有核蛋白及糖蛋白G1生物学活性的融合蛋白,为进一步研究其免疫学特性奠定了基础.
作 者：张芳琳 刘勇 于澜 胡刚 吴兴安 史梦远 白文涛 王海涛 徐志凯 ZHANG Fang-lin LIU Yong YU Lan HU Gang WU Xing-an SHI Meng-yuan BAI Wen-tao WANG Hai-tao XU Zhi-kai 作者单位：第四军医大学微生物学教研室,西安,710032 刊 名：免疫学杂志 ISTIC PKU英文刊名：IMMUNOLOGICAL JOURNAL 年，卷(期)： 22(2) 分类号：Q78 关键词：汉滩病毒 嵌合基因 重组腺病毒篇2：人HIF-1α基因重组腺病毒的构建与鉴定
人HIF-1α基因重组腺病毒的构建与鉴定
目的 构建人缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)基因的重组腺病毒载体,并观察其对HepG2细胞的转染情况.方法 采用基因工程技术,经过亚克隆将人HIF-1α基因片段克隆至穿梭质粒pAdTrack-CMV上,利用pAdEasy系统进行细菌内同源重组后,经脂质体转染HEK293细胞,进行重组腺病毒的包装、扩增.采用PCR方法对重组腺病毒进行鉴定,利用穿梭质粒中带有绿色荧光蛋白GFP报告基因,进行病毒滴度的`测定和对HepG2细胞感染效率的监测.结果 酶切鉴定及PCR结果证明重组腺病毒载体成功,人HIF-1α重组腺病毒滴度达1.15×1010 pfu/ml,阴性对照腺病毒的滴度为8×1010 pfu/ml,并对HepG2细胞具有很强的感染力.结论 应用细菌内同源重组法成功构建了含人HIF-1α基因的重组腺病毒载体.
作 者：蒋春华 高钰琪 黄庆愿 黄缄 贺伟峰 段小军 JIANG Chun-hua GAO Yu-qi HUANG Qing-yuan HUANG Jian HE Wei-feng DUAN Xiao-jun 作者单位：蒋春华,高钰琪,黄庆愿,黄缄,JIANG Chun-hua,GAO Yu-qi,HUANG Qing-yuan,HUANG Jian(第三军医大学,高原军事医学系病理生理学与高原生理学教研室,全军高原医学重点实验室,重庆,400038)贺伟峰,HE Wei-feng(第三军医大学,西南医院全军烧伤研究所,创伤、烧伤与复合伤国家重点实验室,重庆,400038)
段小军,DUAN Xiao-jun(第三军医大学,西南医院骨关节中心,全军矫形外科中心,重庆,400038)
刊 名：第三军医大学学报 ISTIC PKU英文刊名：ACTA ACADEMIAE MEDICINAE MILITARIS TERTIAE 年，卷(期)：2006 28(20) 分类号：Q782 Q789 关键词：腺病毒 HIF-1α基因 同源重组篇3：小鼠MK基因siRNA重组腺病毒载体的构建及鉴定
小鼠MK基因siRNA重组腺病毒载体的构建及鉴定
目的:构建小鼠肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体的'死亡受体(Mouse killer,MK)基因干扰RNA(Small interfering RNA,siRNA)重组腺病毒并在小鼠子宫基质细胞中鉴定其干扰作用.方法:人工合成靶向MK的siRNA干扰序列,将其克隆到穿梭载体psES-HUS上,并与腺病毒骨架质粒pAdeasy-1在BJ5183细菌中进行同源重组,得到pAdeasy-SES-HUS-MKsiRNA,在HEK293细胞中包装并扩增腺病毒颗粒.用纯化后的腺病毒混合液感染原代培养的小鼠子宫内膜基质细胞,RT-PCR及Western Blot检测基质细胞中MK的mRNA及蛋白表达水平.结果:Adeasy-SES-HUS-MKsiRNA混合液均效价为6.8 X 10~(11)pfu/ml,感染原代培养的小鼠子宫内膜基质细胞48h后,MK的mRNA及蛋白水平均显著下调.结论:构建的MK干扰表达腺病毒能有效地抑制MK基因的表达,为进一步研究MK在小鼠子宫基质细胞的功能提供了有效的工具.
作 者：杨根岭 张晋平徐倩 谭冬梅 赖国旗 谭毅 作者单位：重庆医科大学实验动物中心,重庆,400016 刊 名：重庆医科大学学报 ISTIC PKU英文刊名：JOURNAL OF CHONGQING MEDICAL UNIVERSITY 年，卷(期)： 35(2) 分类号：Q953.5 关键词：Mouse killer基因 RNA 干扰 重组腺病毒 Mouse killer gene RNA interference Recombinant adenovirus篇4：乙肝病毒X基因重组腺病毒载体的构建
乙肝病毒X基因重组腺病毒载体的构建
目的 为了探讨HBx基因与肝癌发生的.关系,构建HBx基因重组腺病毒载体.方法 应用pAdEasyTM腺病毒载体系统,首先从质粒pCDNA3.l-HBx中酶切得到HBx基因,插入腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV中,得到pAdTrack-CMV-HBx,将其PmeⅠ酶切线性化后,转到含腺病毒骨架质粒pAdEasy-1的BJ5183感受态细菌中,通过同源重组得到重组腺病毒质粒载体pAd-HBx,经PacⅠ酶切线性化后转染人胚肾293细胞,产生重组腺病毒颗粒Ad-HBx.结果 PCR和酶切鉴定证明重组腺病毒Ad-HBx构建成功,在转染的293细胞中可以观察到绿色荧光蛋白GFP.结论 成功构建了携带HBx基因的重组腺病毒载体,为后续研究奠定了基础.
作 者：史震 李向阳 周峰 李金龙 尤红娟 汤仁仙 SHI Zhen LI Xiangyang ZHOU Feng LI Jinlong YOU Hongjuan TANG Renxian 作者单位：徐州医学院微生物与免疫学教研室,江苏,徐州,221002 刊 名：徐州医学院学报 ISTIC英文刊名：ACTA ACADEMIAE MEDICINAE XUZHOU 年，卷(期)：2010 30(3) 分类号：Q782 R512.6+2 关键词：乙型肝炎病毒 HBx基因 腺病毒载体篇5：携带细胞周期调控基因P14ARF的重组腺病毒的构建
携带细胞周期调控基因P14ARF的重组腺病毒的构建
目的构建携带参与细胞周期调控的.p14ARF基因的重组腺病毒载体.方法将野生型p14ARF全长cDNA基因片段插入腺病毒载体质粒pAdTrack-CMV,与骨架质粒在大肠杆菌BJ5183胞内进行同源重组,经293细胞包装、扩增后得到携带p14ARF的重组腺病毒AdEasy-GFP-p14ARF.结果成功构建了AdEasy-GFP-p14ARF的重组腺病毒载体系统,经测定腺病毒载体滴度达2.3×109 efu/mL.结论构建的重组腺病毒AdEasy-GFP-p14ARF可望有效地将p14ARF基因导入喉癌细胞株/组织内,为进一步研究喉癌细胞信号转导干预治疗机制提供实验基础.
作 者：鲜均明 周光耀 梁传余 刘世喜 XIAN Jun-ming ZHOU Guang-yao LIANG Chuan-yu LIU Shi-xi 作者单位：鲜均明,XIAN Jun-ming(四川大学基础与法医学院,人体解剖学教研室,四川,成都,610041)周光耀,梁传余,刘世喜,ZHOU Guang-yao,LIANG Chuan-yu,LIU Shi-xi(四川大学华西医院,耳鼻咽喉科,四川,成都,610041)
刊 名：华西口腔医学杂志 ISTIC PKU英文刊名：WEST CHINA JOURNAL OF STOMATOLOGY 年，卷(期)： 24(3) 分类号：Q782 关键词：细胞信号转导 重组腺病毒 基因治疗 喉癌篇6：博尔纳病病毒pEGFP-p24基因重组质粒的构建及鉴定
博尔纳病病毒pEGFP-p24基因重组质粒的构建及鉴定
构建博尔纳病病毒pEGFP-p24基因重组表达质粒.通过PCR方法扩增获得博尔纳病病毒p24基因的完整序列,将此片段定向克隆到pEGFP-N1载体多克隆位点区,筛选重组阳性菌株,提取重组质粒,利用PCR方法和核酸序列测定验证重组质粒构建的正确性.PCR及核酸序列测定证明博尔纳病病毒pEGFP-p24基因重组表达质粒构建成功.构建的.重组质粒将为研究博尔纳病病毒p24基因在真核细胞中的功能和作用提供实验依据.
作 者：翟爱霞 答嵘 宋武琦 李小光 李玉军 张凤民 ZHAI AI-xia DA Rong SONG Wu-qi LI Xiao-guang LI Yu-jun ZHANG Feng-min 作者单位：哈尔滨医科大学,微生物学教研室,黑龙江,哈尔滨,150081 刊 名：微生物学杂志 ISTIC英文刊名：JOURNAL OF MICROBIOLOGY 年，卷(期)： 28(3) 分类号：Q93 关键词：博尔纳病病毒 基因重组 PCR 序列分析篇7：采用GatewayTM技术构建人骨形态发生蛋白-2基因重组腺病毒载体
采用GatewayTM技术构建人骨形态发生蛋白-2基因重组腺病毒载体
目的:采用基于attLXattR的λ噬菌体位点特异性重组系统的GatewayTM技术构建人骨形态发生蛋白-2基因重组腺病毒栽体(Ad-hBMP-2).方法:从pcDNA3.1质粒中获取目的基因hBMP-2片段,连入带attL1、attL2位点的入门载体pENTRTM11中.形成入门克隆,将入门克隆与带attR1、attR2位点的目的载体Ad/CMV/V5-DEST在高效重组酶作用下发生体外重组形成表达克隆ad-BMP-2,经鉴定将ad-BMP-2线性化后转入293A细胞包装,通过细胞裂解法获得人骨形态发生蛋白-2的'基因重组腺病毒珠Ad-hBMP-2,将其扩增,采用western blotting技术分析目的蛋白表达.结果:经酶切及测序证实目的基因BMP-2片段按正确方向重组入目的载体中,带BMP-2的目的栽体在293A细胞中包装成功,获得成熟的病毒颗粒,测得病毒滴度为2.5×109pfu/ml.western blotting结果证实Ad-hBMP-2在293A细胞中高效表达hBMP-2蛋白.结论:本实验首次利用基于λ噬菌体的住点特异性重组系统的GatewayTM技术成功构建了Ad-hBMP-2,该技术与传统构建方法比较具有高效性和灵活性,为进一步研究BMP-2的生理功能和利用BMP-2进行骨基因治疗奠定了实验基础.
作 者：蒋红梅 龙洁 汤炜 田卫东 刘磊 林云锋 王杭 李鹏 JIANG Hong-mei LONG Jie TANG Wei TIAN Wei-dong LIU lei LIN Yun-feng WANG Hang LI Peng 作者单位：四川大学华西口腔医学院,成都,610041 刊 名：现代生物医学进展 ISTIC英文刊名：PROGRESS IN MODERN BIOMEDICINE 年，卷(期)：2008 8(2) 分类号：Q78 关键词：骨形态发生蛋白-2 GatewayTM技术 重组腺病毒
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