下面就是小编给大家带来的黑曲霉htmA基因的分离鉴定及其功能分析，本文共7篇，希望大家喜欢阅读!
篇1：黑曲霉htmA基因的分离鉴定及其功能分析
黑曲霉htmA基因的分离鉴定及其功能分析
本研究通过分析比较黑曲霉基因组与人、哺乳动物和酿酒酵母基因组序列同源性,首次分离鉴定了黑曲霉htmA基因,该基因长3459bp,编码1083个氨基酸.已知真核生物的htmA基因编码一种类α-甘露糖苷酶I的非必须蛋白HTMA,在内质网中参与降解非正确折叠的糖蛋白,htmA基因的破坏会延迟非正确折叠糖蛋白的降解.为分析htmA基因在黑曲霉中的.功能,运用同源重组技术敲除黑曲霉基因组中的htmA基因,获得htmA基因缺失突变菌株,并进行了缺失株外源漆酶分泌能力的检测.结果表明黑曲霉htmA基因的破坏延缓了外源漆酶的降解, 由此推测黑曲霉htmA基因编码蛋白HTMA具有与酵母、哺乳动物HTM1P/EDEM类似的功能作用.
作 者：赵颖 秦浚川 王敖全 唐国敏 王华明 ZHAO Ying QIN Jun-Chuan WANG Ao-Quan TANG Guo-Min WANG Hua-Ming 作者单位：赵颖,ZHAO Ying(南京大学生命科学院,南京,210093;中国科学院微生物研究所,真菌和地衣系统学开放实验室,北京,100080)秦浚川,QIN Jun-Chuan(南京大学生命科学院,南京,210093)
王敖全,唐国敏,WANG Ao-Quan,TANG Guo-Min(中国科学院微生物研究所,真菌和地衣系统学开放实验室,北京,100080)
王华明,WANG Hua-Ming(Genencor International Incorporation,California 94304,USA)
刊 名：菌物学报 ISTIC PKU英文刊名：MYCOSYSTEMA 年，卷(期)： 25(4) 分类号：Q939.5 关键词：丝状真菌 ER降解篇2：细菌分离鉴定
细菌分离鉴定
细菌分离鉴定目的要求：
熟悉临床标本中常见的病原性细菌的分离鉴定方法。
实验内容：
一、脓汁、咽拭子等标本中病原性细菌的分离与鉴定
(一)标本采集
1.脓拭子：用无菌棉签蘸取患处深部脓液或分泌物少许，置入无菌空试管内，送检。
2.痰拭子：用消毒容器收集病人痰液，用无菌棉签挑取脓稠痰块，置入无菌空试管内，送检。
3.咽拭子：嘱病人把口张大，用压舌板压住舌根，用无菌棉签迅速蘸取咽部分泌物，置入无菌空试管内，送检。
4.血标本：疑为败血症患者，在严格无菌操作下，静脉采血，床旁直接加入含50ml的肉汤瓶内，立即摇匀后送培养。
5.脑脊液：对疑似流脑患者，作腰椎穿刺取脑脊液，立即行直接床旁接种(送检过程中应注意保温)。
6.尿道、阴-道分泌物：对可疑淋病患者，男性可从尿道取材，取材时导尿管应进入尿道1cm～2cm，如为刚排尿，应等待1h左右;女性则可以从宫颈口取分泌物，当内窥器插入宫颈口后应稍等片刻，再旋转取出，取材应立即送检，不可放置冰箱。
(二)分离鉴定程序
待检标本可直接做涂片染色检查鉴定，必要时可做分离培养、生化反应及致病性鉴定。常见的致病性球菌检查程序如下。
直接涂片、革兰染色、镜检(形态、排列、染色性)
脓、痰、咽拭子
分泌物、脑脊液 观察菌落性状、溶血性、色素
血琼脂平板→ 涂片、染色、镜检
↑ 挑取可疑菌落 生化反应
血液、穿刺液 →肉汤培养基 纯分离 致病性测定
↓ 药敏试验
如培养液混浊时可涂片、染色、镜检
(三)常见临床标本的检查方法
1．脓拭子
在脓汁中除了球菌外，也有杆菌存在，例如革兰阳性的有炭疽杆菌、白喉杆菌、结核杆菌、枯草杆菌等，革兰阴性的'有大肠杆菌、绿脓杆菌、变形杆菌等，此外尚可有真菌、放线菌、螺旋体等。
材料
(1) 标本：脓拭子
(2) 培养基：血琼脂平板
(3) 兔血浆、白色滤纸片、无菌生理盐水、载玻片
方法脓汁 → 革兰染色 → 镜检
↓ ↑
血琼脂平板 →观察菌落形态及溶血情况
↓
致病力试验
(1)将脓拭子作革兰染色，镜检(先作培养再涂片以免污染)。标本放置4℃冰箱保存，待报告发出后再丢弃。
(2)将脓汁涂布于血琼脂平板上，再以灭菌接种环作划线分离。置培养37℃培养18h～24h。
(3)经培养后据菌落特点及涂片检查结果进行初步识别，根据需要再作进一步鉴定。若菌落较大、溶血透明、产生金黄色色素、涂片为革兰阳性球菌并成堆排列时可能系葡萄球菌，应确定其为何种葡萄球菌;必要时再作血浆凝固酶试验及甘露醇发酵试验，确定其致病力。
2.咽拭子
咽喉中存在的细菌较多，可以有厌氧及需氧性链球菌、葡萄球菌、肺炎球菌、四联球菌、脑膜炎球菌、卡他球菌、喉杆菌、结核杆菌枯草杆菌、百日咳杆菌肺炎杆菌及绿脓杆菌等。此外也可有白色念珠菌奋森螺旋体等。本实验以咽拭子作为标本，重点检查病原性球菌。
材料
(1)标本:咽拭子。
(2)培养基:血琼脂平板。
方法
咽拭子
↓
血琼脂平板
↓
观察菌落形态及溶血性
↓
革兰染色，镜检
取标本涂布于血琼脂平板，再以灭菌接种环划线分离，置37℃培养18h～24h培养。标本放置4℃冰箱保存，待报告发出后再丢弃。
可根据下述特点进行鉴别：
(1)在菌落周围产生2mm～4mm宽、界线分明、完全透明的溶血环、涂片为革兰阳性球菌并呈链状排列，可能是乙型溶血性链球菌。
(2)菌落细孝半透明、有草绿色溶血环、涂片为革兰阳性球菌呈链状排列，可能为甲型溶血性链球菌。需要进一步与肺炎球菌区别时，可做胆汁溶菌试验及菊糖发酵反应。
菌落细小半透明、不溶血、涂片为革兰阳性链状排列的球菌时，为丙型链球菌。
(4)菌落扁平边缘隆起、中央稍凹、半透明、呈草绿色溶血、革兰染色为阳性双球菌、呈矛头状排列时为肺炎球菌，应以胆汁溶菌及菊糖发酵反应与甲型溶血性链球菌区分。
(5)菌落中等大孝表面光滑、呈灰色、革兰染色为阴性双球菌，呈肾形排列时，可能为脑膜炎球菌，需要进一步作氧化酶试验及糖发酵试验(接种于含血清之葡、麦、蔗糖发酵管中)。
二、粪便标本中肠道杆菌的分离与鉴定
(一)标本收集
取患者的粪便或肛-门拭子。
(二)鉴定程序
肠道杆菌为一大群革兰阴性杆菌，从形态及染色性上无法鉴别为何种菌，只能依靠生化反应和血清学反应进行鉴定。
患者粪便(粘液、脓血)→肠道选择、鉴别培养基(如ss、中国蓝、伊红美兰)
↓
挑取可疑菌落(据大孝颜色、透明度而定)
↓
双糖铁及其他鉴别培养基
↓
据结果分析鉴定
↓
玻片凝集(做出特异性诊断)
葡萄糖乳糖动力H2S尿素
±--艾希菌属非致病菌
+---克雷伯菌属
±+++变形杆菌
-++-乙型副伤寒致病菌
-+±-甲型副伤寒
+-++-伤寒杆菌
+----痢疾杆菌
篇3：香蕉凝集素基因启动子的分离、序列分析及鉴定
香蕉凝集素基因启动子的分离、序列分析及鉴定
香蕉是世界上最重要的水果之一,由于香蕉果实是利用转基因方法生产重组药用蛋白或有价值的化合物的理想器官,构建能在香蕉果实中高水平表达异源蛋白质的表达载体是非常有意义的.而一个高效表达的载体,启动子则是其最重要元件之一,因此,果实特异性表达启动子的获得是香蕉作为生物反应器的前提.香蕉凝集素是一种在香蕉果实中大量存在的蛋白质,其基因被证明在果肉组织中大量表达.利用染色体步移法克隆到香蕉凝集素基因5′端上游的一段长702bp的`序列,经序列测定及软件分析表明,该序列具有典型的启动子结构.此序列置换植物表达载体pBI121的CaMV 35S启动子,构建植物表达载体,命名为pBIL2,该启动子下游为gus基因.利用基因枪法转化香蕉的根、叶和果实薄片,对gus基因的瞬时表达进行测定,结果表明所获得的凝集素基因启动子,只在香蕉果肉中瞬时表达,该启动子的表达具有果实特异性,并且表达量较高.
作 者：徐碧玉 刘歌 金志强 XU Bi-Yu Liu Ge JIN Zhi-Qiang 作者单位：中国热带农业科学院生物技术研究所,热带作物生物技术国家重点实验室,海口,571101 刊 名：生物工程学报 ISTIC PKU英文刊名：CHINESE JOURNAL OF BIOTECHNOLOGY 年，卷(期)： 22(6) 分类号：Q781 关键词：香蕉 香蕉凝集素基因 启动子 果实特异表达篇4：红系分化相关基因相互作用蛋白质的分离与鉴定
红系分化相关基因相互作用蛋白质的分离与鉴定
目的 制备红系分化相关基因(erythroid differentiation-associated gene,EDAG)蛋白的单克隆抗体,利用免疫沉淀联合质谱技术对EDAG相互作用蛋白质进行分离与鉴定.方法 构建EDAG原核表达载体,通过诱导、表达、纯化获得EDAG融合蛋白,杂交瘤技术建立分泌EDAG单克隆抗体的杂交瘤细胞株,利用Western印迹筛选阳性杂交瘤细胞,免疫小鼠得腹水,最后用免疫共沉淀与质谱联合鉴定EDAG相互作用蛋白.结果 纯化获得EDAG重组蛋白,筛选出4株分泌EDAG单克隆抗体的杂交瘤细胞株,并制备了腹水.该抗体均可用于内源EDAG蛋白的`检测,其中两种抗体可用于免疫共沉淀实验,运用质谱技术筛选获得EDAG候选相互作用蛋白.结论 利用EDAG单克隆抗体,筛选到EDAG候选相互作用蛋白质13种,涉及细胞增殖及转录等过程,为EDAG的功能研究及其分子机制的阐明提供了新的线索.
作 者：徐诚望 王治东 李长燕 许望翔 詹轶群 于淼 杨晓明 XU Chengwang WANG Zhidong LI Changyan XU Wangxiang ZHAN Yiqun YU Miao YANG Xiaoming 作者单位：军事医学科学院放射与辐射医学研究所北京市,100850 刊 名：医学分子生物学杂志 ISTIC英文刊名：JOURNAL OF MEDICAL MOLECULAR BIOLOGY 年，卷(期)： 5(4) 分类号：Q71 关键词：单克隆抗体 免疫共沉淀 质谱 相互作用蛋白质篇5：基因分离定律的实质
对基因分离现象有以下几点解释：
1、生物的性状是由基因决定的`。
2、体细胞中遗传因子是成对存在的。
3、形成配子时，等位基因彼此分离，分别进入不同的配子中。
4、受精时，雌、雄配子的结合是随机的。
篇6：高一基因分离定律课件
高一基因分离定律课件
一、知识结构
1.遗传学奠基人――孟德尔；
2.孟德尔的豌豆杂交试验；
3.一对相对性状的遗传试验；
4.对分离现象的解释。
二、教学目标
1.知识与技能目标
（1）了解遗传基本规律研究的一般方法――杂交法。
（2）理解一对相对性状的遗传实验及其解释。
2.过程与方法目标
（1）通过了解孟德尔的杂交试验过程，掌握研究问题的一般方法。
（2）通过学习分离定律培养学生分析问题解决问题的能力。
3.情感态度价值观目标
（1）运用辩证唯物主义的观点分析和认识生物体生命活动的基本规律，逐步树立科学的世界观。
（2）通过孟德尔八年试验研究事迹，进行热爱科学、献身科学的教育。
三、教学重点、难点
对分离现象的解释，引导学生逐步分析得出结论，并用模拟实验加深理解。
四、课时分配
第1课时：
1.遗传学奠基人――孟德尔；
2.孟德尔的豌豆杂交试验；
3.一对相对性状的遗传试验；
4.对分离现象的解释；
第2课时：1.对分离现象解释的验证；
2.基因的分离定律的实质；
第3课时：1.基因型和表现型；
2.基因分离定律在实践中的应用及事例分析。
五、教学流程
1.引言
一对夫妇都有耳垂，却生了一个没有耳垂的小孩。难道这个小孩不是他们的吗？另一对夫妇，一个是A型血，一个是B型血，却生了一个O型血的小孩。难道这个小孩也不是他们的吗？或是有什么问题？但从遗传学角度来看，没有问题，一点都不奇怪，完全符合遗传规律。为什么呢？学习了今天的课程你就能找到答案。
今天我们就来一起学习第六章第二节《遗传的基本规律》的第一个内容《基因的.分离定律》。
基因的分离定律是由孟德尔最先揭示的（同时出示投影标题板书：1.遗传学奠基人――孟德尔，随后出示投影片介绍孟德尔生平）。
2.过渡
孟德尔之所以能成功地揭示出遗传学两个基本定律，除了他对自然科学的热爱和坚持不懈的精神外，还在于他正确的实验方法。他实验成功的原因主要有哪些呢？下面我们来看下一个课题：孟德尔取得实验成功的原因。
3.重点讲解
（1）正确的选择实验材料
孟德尔采用豌豆作为实验材料，是因为豌豆是自花传粉植物。自花传粉是花粉落到同一朵花的柱头上。异花传粉是花粉落到另一朵花的柱头上。异花传粉时，可能发生在不同植株之间，甚至是不同品种的植株之间。为什么要选择自花传粉的植物为实验材料呢？
学生讨论后回答：自花传粉与异花传粉植物相比，它不会受到外来花粉的干扰。因此，用豌豆做人工杂交试验时，结果既可靠又容易分析。
教师：再加之不同豌豆品种之间同时具有多对相对性状。（对照投影讲解）如豌豆的高茎与矮茎、圆粒与皱粒、豆荚的黄色与绿色等都是相对性状。正因为豌豆不同品种间具有多对相对性状，使得杂交实验的结果很容易观察和分析。我们顺便了解一下，什么叫相对性状。
首先请同学们来观察几对相对性状，判断几组性状是否是相对性状，增加对相对性状的感性认识，然后归纳相对性状的概念和相对性状是同一生物同一性状的不同表现类型。
（2）从简单问题入手，解决复杂问题
由于生物个体的多种性状往往是同时存在，不便于观察和分析。所以孟德尔先从每一对性状的遗传开始研究，使问题简单化。
（3）使用了统计方法对实验结果进行分析
由于上述三个主要原因，使孟德尔成功取得了遗传研究的成功。孟德尔是通过什么途径来研究遗传规律的呢？是豌豆的杂交实验，杂交是遗传学研究最基本的方法。但豌豆的杂交是如何操作的呢？
学生：人工异花传粉。
教师：如果在人工异花传粉之前就自花授粉了呢？
学生：先去雄，待花未成熟时就对花进行去雄处理。
教师：去雄处理后要对花进行套袋，防止外来花粉干扰。待花成熟以后，取另一品种的花粉涂在雌蕊柱头上，完成杂交操作。提供花粉的植株叫父本，接受花粉的叫母本。
孟德尔首先用高茎豌豆与矮茎豌豆进行杂交。请同学推测一下它的后代是高茎还是矮茎呢？
学生：可能是高茎，也可能是矮茎。
教师：子一代，用F1表示是高茎。
有同学可能会说，杂交时是将高茎作为父本的吧。（讲解）无论是用高茎做母本进行正交，还是用高茎做父本进行反交，子一代总是表现为高茎。子一代为什么不表现为矮茎呢？
孟德尔又用子一代进行自交，结果子二代中同时表现出高茎和矮茎现象，而且孟德尔对子二代进行统计分析发现，高茎与矮茎的数量比接近于3：1。
为什么会出现上述现象呢？
为了描述的方便，我们首先来学习几个概念。
（出示投影片：图《杂交后代性状的表现》）
对照图提问：为什么将高茎叫作显性性状，短茎叫作隐性性状？
学生：高茎表现得多一些。
教师：正确。但除此现象外，有更准确的定义。
教师补充：（指示图同时讲述）纯种亲本杂交时，将子一代表现出的性状叫作显性性状。将子一代没有表现出的性状叫作隐性性状。将杂交后代同时表现出显性性状和隐性性状的现象叫作性状分离。
所以，实验现象我们也可以描述为：
①子一代：只表现出显性性状；
②子二代：性状分离；
③子二代：显性性状：隐性性状≈3：1。
上述现象是否有偶然性呢？能说明遗传的普遍规律吗？孟德尔又对另外6对相对性状做了类似的杂交实验都表现出同样的结果。这说明一定有内在的规律。
孟德尔经过反复思考对此做出了解释。孟德尔认为：性状是由基因控制的，控制显性性状（如高茎）的基因是显性基因，用大写英文字母（如D）表示，控制隐性性状（如矮茎）的是隐性基因，用小写英文字母（如d）表示。如纯种高茎豌豆的体细胞中含有成对的基因DD，纯种矮茎豌豆的体细胞中含有成对的基因dd。
教师：在体细胞中基因成对存在的原因是什么呢？
学生：成对基因分别存在于同源染色体上。
（出示投影片：杂交分析图解）
指示投影片并讲解：生物体在形成配子生殖细胞――配子时，成对的基因彼此分离，分别进入不同的配子。
教师：在形成配子时，成对基因分离的原因是什么？用我们已有的知识如何解释呢？
学生：减数分裂时同源染色体分离。
教师：（对照图讲解）因此，纯种高茎豌豆的配子只含有一个显性基因D；纯种矮茎豌豆的配子只含有一个隐性基因d。受精时，雌雄配子结合，合子中的基因又恢复成对。如基因D与基因d在F1体细胞中又结合成Dd。由于基因D对基因d的显性作用，F1（Dd）表现为高茎。在F1（Dd）自交产生配子时，同样，基因D和基因d又会分离，这样F1产生的雄配子和雌配子就各有两种：一种含有基因D，一种含有基因d，并且这两种配子的数目相等。受精时，雌雄配子随机结合，F2便出现4种组合，3种基因型：DD、Dd和dd，并且它们之间的数量比接近于1：2：1。由于基因D对基因d的显性作用，F2在性状表现上只有两类型：高茎和矮茎，并且这两种性状之间的数量比接近于3：1。
4.讲解实验方法
按照孟德尔的假设推论出的上述几种基因组合及其数量比是否正确呢？下面我们不妨来做一个模拟小实验。
同学们桌上的塑料袋中都放有黑白两种围棋子各20粒，我们用黑色的棋子表示含显性基因（D）的配子，用白色的棋子表示含隐性基因（d）的配子。
（边讲边示范）
六、小结
今天的新课就学习到这里，让我们来回顾一下今天学习的内容。我们今天了解了基因的分离定律是由孟德尔最先揭示的，孟德尔取得成功的原因，孟德尔的豌豆杂交实验操作及现象，孟德尔对实验现象的解释等内容。孟德尔有关分离现象的解释是否正确呢？根据实验方法，我们还需要加以验证，下节课我们将继续讨论有关对分离现象解释的验证。
七、教学反思
基因分离定律是遗传学基本规律，是有丝分裂、减数分裂、受精作用、个体发育、遗传的物质基础，三大遗传规律、可遗传的变异、生物的进化这条主线上的重要环节，它承上启下，减数分裂是基因分离定律的细胞学基础，自由组合定律又是在基因分离定律基础上总结出来的，它是培养学生知识迁移能力，提高学生分析问题解决问题的好时机。
篇7：人FXR基因5调控区功能分析
人FXR基因5调控区功能分析
为研究人法尼酯衍生物X受体(FXR)基因5'调控区的功能,在对人FXR基因进行生物信息学分析的`基础上,用5'RACE法确定该基因的转录起始位点碱基是A.采用PCR技术,扩增人基因组DNA中FXR基因5'上游序列,构建了5种含不同长度启动子序列的荧光素酶报告基因表达体系.将它们瞬时转染HepG2细胞,检测其荧光素酶活性.结果表明,-1 651～+200、-1 496～+200区域的启动子活性无明显区别,-847～+200区域的启动子活性最高,-544～+200区域启动子活性较前显著降低.研究提示,FXR基因转录所必需的基因启动子序列在-847～-544范围内.
作 者：娄桂予 陈敏 李渝萍 李强 陈彬 陈健 廖荣霞 周度金 LOU Gui-Yu CHEN Min LI Yu-Ping LI Qiang CHEN Bin CHEN Jian Liao Rong-Xia ZHOU Du-Jin 作者单位：第三军医大学生物化学与分子生物学教研室,重庆,400038 刊 名：中国生物化学与分子生物学报 ISTIC PKU英文刊名：CHINESE JOURNAL OF BIOCHEMISTRY AND MOLECULAR BIOLOGY 年，卷(期)：2006 22(4) 分类号：Q78 关键词：法尼酯衍生物X受体 启动子 转录调控★职责分离
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